От пробиотиков к метабиотикам: эволюция развития 

Нельзя повернуть время вспять, но можно отследить исторический путь! 

Вначале появились пробиотики. Врачи стали использовать живые, полезные для человека микроорганизмы, выращенные в лабораториях, чтобы решить проблемы с дисбактерозами. Идея была «подселить» в организм чужие полезные кишечные бактерии после того, как свои были уничтожены антибиотиками. Казалось, что новые «жители» подстроятся, со временем приживутся и так восстановится баланс микрофлоры.

Но спустя 20 лет, врачи и ученые убедились, что пробиотики не приживаются в организме! Наша иммунная система, работающая по принципу «свой-чужой», отвергает чужеродные микроорганизмы и выводит их в течение 5-7 дней. 

Если чужое не приживается, нужно усилить свое! Так появились пребиотики – «корм» для наших бактерий. Ведь если как следует накормить полезные бактерии, они станут сильнее и вытеснят вредные. Но выяснилось, что вместе с полезными бактериями пребиотики кормят и плохие! Проблема не решалась.

Как сделать так, чтобы пробиотики оставались в организме как можно дольше? Возникла идея «кормить гостей» – соединить про-и пребиотики!

Казалось, что решение поставит точку в вопросе восстановления баланса микрофлоры кишечника, но..иммунная система все равно распознавала «чужаков» и беспощадно расправлялась с ними! Микрофлора у каждого уникальна и неповторима как видами бактерий, так их количеством 

Ученые продолжили исследования, которые привели к тому, что на свет появилось принципиально новое средство.

В экспериментах на крысах изучена эффективность экстракта брожения кисломолочных бактерий Daigo с целью профилактики и коррекции нарушений состава микрофлоры и изменений моторной активности тонкой кишки при дисбиозе. 

Экспериментальный дисбиоз, вызванный 7-дневным пероральным приемом противомикробных препаратов (амоксициклин+метронидазол), проявлялся существенными нарушениями в качественном и количественном составе микрофлоры тощей и слепой кишки. Профилактическое введение Daigo до введения противомикробных препаратов устраняло признаки дисбиоза. 

Введение Daigo после моделирования дисбиоза приводило к восстановлению моторной функции кишечника, нормализации численности условно-патогенных микроорганизмов в тощей кишке и снижению содержания условно-патогенных микроорганизмов в слепой кишке. 

Ключевые слова: экстракт брожения кисломолочных бактерий, микрофлора, моторная функция кишечника, экспериментальный дисбиоз. 

Как известно, дисбактериоз кишечника – это синдром, сопутствующий многим патологическим состояниям и являющийся, в сущности, следствием патологического процесса. 

Среди многих причин возникновения дисбактериоза значимое место занимают нарушения микробиоценоза вследствие приема антибактериальных препаратов. Современные антибиотики являются основными средствами борьбы с инфекционными заболеваниями бактериальной природы. Часто вследствие их бесконтрольного использования отмечается гибель не только патогенных микроорганизмов в естественных биотопах, но и представителей нормальной микрофлоры человека. 

Концепция функционального питания, впервые сформулированная в Японии в конце 1990-х годов, получила широкое признание в решении проблемы коррекции состояния микроэкологической системы человека, являясь в наиболее развитых странах мира одним из приоритетных направлений в профилактике и лечении большинства хронических заболеваний. 

Функциональное питание объединяет продукты естественного или искусственного происхождения, которые предназначены для систематического ежедневного употребления и оказывают регулирующее действие на физиологические функции, биохимические реакции и психосоциальное поведение человека через нормализацию его микроэкологического статуса. 

В последнее время очень часто вопросы функционального питания обсуждаются в контексте развития проблемы использования про-, пре- и синбиотиков . Это связано прежде всего с тем, что концепция функционального питания становится более направленной на специальные продукты, которые могут положительно влиять на состав кишечной микрофлоры. Так, при первом успешном опыте трансплантации тонкой кишки в НИИ СП им. Н.В. Склифосовского было продемонстрировано, что коррекция микрофлоры органов желудочно-кишечного тракта с помощью 2% раствора свекловичного пектина и пробиотиков привело к элиминации условно-патогенной флоры. 

С апреля 2015 г. на российском рынке функциональных продуктов зарегистрирован и разрешен к применению японский продукт Daigo для поддержания микробиоценоза кишечника, усиления иммунитета, а также решения гастроэнтерологических проблем. В качестве активного ингредиента Дайго содержит специально подобранный экстракт брожения 16 штаммов лактобактерий. 

Daigo был разработан в качестве нового типа продуктов, производимых из кисломолочных бактерий, способствующих улучшению функционального состояния желудочно-кишечного тракта. В отличие от пробиотиков Daigo не содержит живых кисломолочных бактерий. Daigo представляет собой смесь пептидов – биорегуляторов, экстрагированных из бактериальных клеток 16 штаммов физиологических лактобактерий, колонизирующих кишечник здорового человека. Для получения соевого молока, используемого в качестве среды для культивирования кисломолочных бактерий, применяются специальные соевые бобы, выращенные органическим путем без пестицидов и химикатов. 

Экстракт кисломолочных бактерий является смесью секреторных продуктов и клеточных веществ кисломолочных бактерий, полученных при их брожении. Исследования последних лет показали, что клеточные вещества и продукты брожения метаболизированных кисломолочных бактерий оказывают лучшее действие на кишечную регуляцию и жизненные функции, чем жизнеспособные кис-ломолочные бактерии. 

Цель исследования – изучение эффективности функционального продукта Дайго в профилактике и коррекции состава микрофлоры и моторных нарушений тонкой кишки при экспериментальном дисбиозе у крыс. 

Исследования были проведены на 28 взрослых крысах самцах (масса тела – около 300 г, возраст – 4 месяца) линии Вистар. 

Крысы были получены из питомника ООО «НеоМаркет». Все экспериментальные животные содержа-лись в стандартных условиях вивария НИИ СП им. Н.В. Склифосовского, получали воду и сбалансированный рацион питания (гранули-рованный корм, изготовленный по заказу ООО «Лабораторкорм») без ограничения. Световой режим – естественный. 

Все животные были разделены на 4 экспериментальные группы по 7 животных в каждой: 

1. Контрольная группа – интактные животные (n = 7). У этих крыс была измерена эвакуаторная активность кишечника, а также взяты образцы содержимого тощей и слепой кишки для микро-биологического исследования. 

2. Группа «Дисбиоз» – группа с эксперимен-тальным дисбиозом (n = 7). Крысам ежедневно однократно в течение 7 суток перорально вводили раствор противомикробных препаратов (амоксициклин+метронидазол). На 8-е сутки эксперимента у крыс была измерена эвакуаторная активность кишечника, а также взяты образцы содержимого тощей и слепой кишки для микробиологического исследования.

3. Группа «Дисбиоз + Daigo» – группа с экспериментальным дисбиозом и корригирующим введением тестируемого раствора Daigo (n = 7). Крысам ежедневно однократно в течение 7 суток перорально вводили раствор противомикробных препаратов (амоксициклин+метронидазол), а с 8- го по 21-й день – тестируемый раствор Daigo. На 22-е сутки эксперимента у крыс была измерена эвакуаторная активность кишечника, а также взяты образцы содержимого тощей и слепой кишки для микробиологического исследования. 

4. Группа «Daigo + Дисбиоз» – группа с профилактическим введением тестируемого раствора Дайго и последующим введением противомикробных препаратов (амоксициклин+метронидазол) (n = 7). Крысам ежедневно однократно в течение 14 суток перорально вводили тестируемый раствор Daigo, затем с 15-го по 21-й день – раствор противомикробных препаратов. На 22-е сутки эксперимента у крыс была измерена эвакуаторная активность кишечника, а также взяты образцы содержимого тощей и слепой кишки для микробиологического исследования. 

Раствор Daigo вводили в количестве 0,33 мл/кг, амоксициклин – в дозе 28,5 мг/кг, метронидазол – в дозе 22,8 мг/кг.

Перед введением каждое животное взвешивали и производили расчет дозы препарата с учетом индивидуальной массы тела крысы.

Противомикробные препараты и исследуемый продукт Daigo вводили перорально, ежедневно с 9 до 11 часов утра. 

Измерение эвакуаторной активности тонкой кишки 

Измерение эвакуаторной активности тонкой кишки у экспериментальных 

животных производили с помощью инертного маркера Evans Blue. 

Для измерения эвакуаторной активности кишечника крысам per os вводили маркер Evans Blue. Через 20 минут крыс усыпляли. На вскрытии выделяли тонкую кишку (от пилоруса до слепой кишки) и измеряли длину всей кишки и расстояние, которое прошел маркер за 20 минут. Индекс транзита – ИТ, выраженный в процентах, определяли как отношение расстояния, пройденного маркером, к общей длине кишки, умноженное на 100. 

Для забора проб выделяли участок тощей кишки на расстоянии 15 см от связки Трейтца длиной 5 см. В стерильную пробирку специальной лопаточкой брали кишечное содержимое (для исследования полостной микрофлоры тощей кишки). Затем выделенный участок промывали стерильным физиологическим раствором, производили соскоб пристеночного слоя (для исследования пристеночной микрофлоры тощей кишки) и помещали пробу в стерильную пробирку. Далее выделяли слепую кишку. В стерильную пробирку специальной лопаточкой брали кишечное содержимое (для исследования полостной микрофлоры слепой кишки). 

Бактериологические исследования Микробиологическое исследование кала и содержимого тощей и слепой кишки проводили в соответствии с нормативными документами, принятыми для исследования кала у людей: отраслевым стандартом 91500.11.0004-2003 "Протокол ведения больных. Дисбактериоз кишечника". Были изучены 9 групп микроорганизмов: Staphylococcus spp., Streptococcus spp., Enterococcus spp., Escherichia coli (E.coli), Proteus mirabilis, Klebsiella spp., неферментирующие грамотрицательные бактерии (НГОБ), Bifidobacterium spp. и Lactobacillus spp.

Данные представляли в виде медианы и персентилей – Ме (25; 75)%. Для статистического анализа использовали непараметрический U-критерий Манна–Уитни. Статистически значимыми считались значения при p<0,05. 

Изучение эффективности функционального продукта Дайго в профилактике и коррекции моторных нарушений тонкой кишки при экспериментальном дисбиозе у крыс 

Через 7 дней приема противомикробных препаратов (амоксициклин+метронидазол) у животных в группе «Дисбиоз» было выявлено статистически значимое замедление транзита содержимого по кишечнику по сравнению с контрольной группой – с 30,34 (19,56; 44,55)% до 25,17 (23,41; 31,84)% (p < 0,05). 

При изучении изменений моторной функции тонкой кишки у животных группы «Дисбиоз+Daigo» отмечена тенденция к восстановлению транзита по кишечнику до 32,17 (24,05; 37,76)% по сравнению с группой «Дисбиоз» – 25,17 (23,41; 31,84)% (p > 0,05). 

При сравнении изменений эвакуаторной функции тонкой кишки у животных группы «Дисбиоз+Daigo» с контрольной группой статистически значимых различий не выявлено. Так, в группе «Дисбиоз+Daigo» ИТ составлял 32,17 (24,05; 37,76)%, а в контрольной – 30,34 (19,56; 44,55)% (p > 0,05), что свидетельствовало о нормализации транзита кишечного содержимого после приема Daigo. 

При сравнении изменений моторной функции тонкой кишки у животных группы «Daigo + Дисбиоз» по отношению к группе «Дисбиоз» выявлена тенденция к восстановлению транзита содержимого по кишечнику. Так, в группе «Daigo + Дисбиоз» ИТ составлял 30,16 (28,36; 36,15)%, а в группе «Дисбиоз» – 25,17 (23,41; 31,84)% (p > 0,05). При сравнении изменений эвакуаторной функции тонкой кишки у животных группы «Daigo + Дисбиоз» с контрольной группой статистически значимых различий не выявлено. 

Так, в группе «Daigo + Дисбиоз» ИТ составлял 30,16 (28,36; 36,15)%, а в контроль-ной – 30,34 (19,56; 44,55)% (p > 0,05), что свидетельствовало о нормализации транзита кишечного содержимого при приеме Daigo. 

Таким образом, при моделировании экспериментального дисбиоза происходит нарушение моторной функции тонкой кишки, выражающееся в замедлении скорости транзита содержимого по кишечнику. Введение Daigo с целью как коррекции, так и профилактики дисбиоза приводит к нормализации моторной функции тонкой кишки.